正规论文浅析我国转基因生物检测技术的应用现状

　　【摘　要】随着我国科学技术的发展，转基因生物在我国食品中得到了应用，由于其生物安全管理技术性较强，需要我们对我国的转基因生物检测技术进行进一步的研究，为转基因生物检测的科学性和技术性奠定基础。当前，在我国的转基因生物应用过程中，我国常见的转基因生物检测技术主要有PRC技术、DNA提取技术等，正规论文在本文中，我们将对当前我国转基因生物检测技术的主要内容进行简要介绍，以期为我国未来转基因生物检测技术的发展奠定良好的技术基础。

　　【关键词】转基因生物检测技术;应用;DNA提取技术;PRC技术

　　转基因技术对于提高作物产量、改善作物品质方面做出了巨大贡献，也缓解了国际上的粮食危机。随着转基因技术的发展，转基因生物检测问题在国内外已经引起极大的关注，不同领域的专家都从自己的专业角度对这个问题进行了很多研究，主要通过技术层面来分析转基因生物的安全性问题。下面让我们共同对国内外转基因生物检测技术的发展现状进行探索。

　　转基因技术的理论基础来源于进化论衍生来的分子生物学，DNA片段被转入特定生物中，与其本身的基因组进行重组，再从重组体中进行数代的人工选育，从而获得具有稳定表现特定的遗传性状的个体。当前应用较为广泛的转基因生物检测技术主要有如下几种：

　　一、普通PCR聚合酶链式反应

　　PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度，DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。

　　二、实时荧光PCR技术

　　实时荧光PCR法是目前最有发展前途的定量检测方法，也是目前最适合出入境检验检疫的检测技术之一。所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光集团，利用荧光信号积累，实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。该方法可以有效提高检测的准确性和灵敏度。它既能做定性检测，加入标准品也能做定量检测。

　　三、DNA芯片检测技术

　　DNA芯片检测的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG，与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列。据此可重组出靶核酸的序列。

　　DNA提取的主要方法有如下几种：

　　1、浓盐法

　　利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯纳提取化钠抽提，得到的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡，使其乳化，再离心除去蛋白质，此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中，用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来。也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP，再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白，再按氯仿---异醇法除去蛋白。两种方法比较，后种方法使核酸降解可能少一些.。除此之外，还可以用稀盐酸溶液提取DNA 时，加入适量去污剂，如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用，在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂，通常用15MNaCL，0.015M柠檬钠，并称SSC溶液，提取DNA。

　　2、阴离子去污剂法

　　用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性，可以直接从生物材料中提取DNA 。由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合，因为阴离子去污剂能够破坏这种价键，所以常用阴离子去污剂提取DNA。

　　3、苯酚抽提法

　　苯酚作为蛋白变性剂，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA。此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是可以使提取的DNA保持天然状态。

　　4、水抽提法

　　水抽提法主要是利用核算溶解于水的性质，将组织细胞破碎后，用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，离心后收集上清液，在上清液中加入固体氯化钠调节至2.6M，加入两倍体积的百分之九十五乙醇，立即用搅拌法搅出，然后分别用百分之六十、百分之八十和百分之九十五的乙醇以及丙酮洗涤，最后在空气中干燥，既可以得到DNA样品，用这种方法提取的DNA蛋白质含量较高，因此一般不会使用。如果为了去除蛋白可将此法进行改良，在提取的过程中加入SDS。

　　四、结语

　　随着科学技术的发展，转基因生物极大缓解了我国的粮食危机。综上所述，国外转基因生物检测技术已经进入发展的成熟期，取得了惊人的成果，我们应加强与国外的技术合作和交流，建立健全转基因生物检测管理体系，加大对硬件设施的投入，加快检测技术的研发和推广，从而完善我国转基因生物检测相关法律，并促进我国转基因生物事业的发展。

　　《中国农业科学》1960年创刊，是农业部主管，中国农业科学院主办的综合性、学术性月刊。中国农业科学院院长翟虎渠任编委会主任/主编，中国农业科学院副院长刘旭、屈冬玉，中国工程院院士郭予元、方智远，著名美籍农业科学家耿旭，中国农业科学院农业信息研究所所长许世卫等分别出任编委会副主任、副主编。还有以两院院士和资深农业科学家为主的阵容强大的顾问组织及海内外著名学者组成的编委会。

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