临床药理学论文不同产地翼首草中总皂苷的含量比较探微

　　摘要：目的比较不同产地翼首草中总皂苷的含量。方法采用紫外分光光度法，以齐墩果酸为对照品，香草醛冰醋酸和硫酸溶液为显色剂，测定波长为535 nm。结果在25.35～45.63 g范围内，齐墩果酸的吸光度与含量线性关系良好，相关系数r=0.999 9。平均回收率为91.94% ，RSD为0.87%(n=9)。结论不同产地翼首草中总皂苷含量差异不大，但根中总皂苷的含量可能比全草中高。

　　关键词：翼首草,总皂苷,紫外分光光度法,含量测定,临床药理学论文

　　翼首草为川续断科植物匙叶翼首草Pterocephalus hookeri(C.B.Clarke)Hoeck的干燥全草，是藏医常用植物药，主产于西藏、青海、甘肃、四川等地。具有解毒除瘟，清热止痢，祛风通痹的功效。其主要成分为熊果酸(又名乌索酸，ursolic acid)、齐墩果酸(oleanolic acid)等三萜皂苷类化合物0 ，此外还含有生物碱、多糖等化学成分。本实验采用紫外分光光度法，详细考察了影响总皂苷提取的6个主要因素，确定了最佳制备方法，并对13批不同主产地和不同药用部位的翼首草中的总皂苷含量进行了比较。

　　1 仪器与试药

　　UV一1601紫外一可见分光光度仪(日本岛津);BS 224S电子天平(十万分之一，德国赛多利斯);AEG一45SM电子分析天平(日本岛津);HH—S型水浴锅(巩义市予华仪器有限责任公司)。熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110742—200516);齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110709—200505)，其余试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 对照品溶液的制备取齐墩果酸对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每毫升含齐墩果酸0.845 mg的溶液，作为对照品溶液。

　　2.2 供试品溶液制备方法的考察

　　2.2.1 提取溶媒和水解方式的考察 取翼首草粉末(过2号筛)约0.1 g，精密称定，分别加无水乙醇30 ml，甲醇30 ml，再加浓盐酸3 m1，于8&C水浴回流2 h，滤过，滤液蒸干，残渣加蒸馏水1O ml超声溶解，用醋酸乙酯振摇提取4次，10 ml/次，合并醋酸乙酯液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇转移至1O ml量瓶中，并加无水乙醇稀释至刻度，得供试品溶液A，B。取翼首草粉末(过2号筛)约0.1 g，精密称定，分别加无水乙醇30 ml，甲醇30 ml，于80°C回流2 h，滤过，滤液蒸干，残渣分别加HC1(3一lO)l0 ml水解2 h，按供试品溶液A制备，从“用醋酸乙酯”起依法操作，得供试品溶液C，D。精密吸取供试品溶液A、B、C、D各适量于具塞试管中，按“2. 3”项下依法显色测定吸光度，计算含量分别为6.07% ，5.38% ，1.47% ，1.69% 。结果表明，提取溶媒为无水乙醇，加3ml浓盐酸，回流提取和水解同步进行时，所得总皂苷含量最高。

　　2.2.2 无水乙醇用量的考察取翼首草粉末(过2号筛)约0.1g，精密称定，分别加无水乙醇10，20，30，40 ml，浓盐酸3 ml，于80℃ 回流2h，按“2.2.1”项下供试品溶液A制备，从“滤过”起依法操作，即得。精密吸取上述供试品溶液各适量于具塞试管中，按“2.3”项下依法显色测定吸光度，计算含量分别为5.69% ，5.83% ，6.06% ，5.48% 。结果表明，无水乙醇用量为30 ml时，所得总皂苷含量最高。

　　2.2.3 提取温度的考察取翼首草粉末(过2号筛)约0.1 g，精密称定，加无水乙醇30 ml，浓盐酸3 ml，分别于80，90，1O0°C水浴回流2h，按“2.2.1”项下供试品溶液A制备，从“滤过”起依法操作，即得。精密吸取上述供试品溶液各适量于具塞试管中，按“2.3”项下依法显色测定吸光度，计算含量分别为6.07% ，6.31% ，6.20% 。结果表明，提取温度为90°C时，所得总皂苷含量最高。

　　2.2.4 水解时间的考察取翼首草粉末(过2号筛)约0.1 g，精密称定，加无水乙醇3O ml，浓盐酸3 ml，于9O℃分别回流1，2，3，4 h，按“2.2.1”项下供试品溶液A制备，从“滤过”起依法操作，即得。精密吸取上述供试品溶液各适量于具塞试管中，按“2.3”项下依法显色测定吸光度，计算含量分别为5.84% ，6.30% ，6.59% ，6.41% 。结果表明，水解时间为3h时，所得总皂苷含量最高。

　　2.2.5 萃取次数的考察取翼首草粉末(过2号筛)约0.1 g，精密称定，加无水乙醇30 ml，浓盐酸3 ml，于90℃水浴回流3 h，滤过，滤液蒸干，残渣加蒸馏水1O ml超声溶解，分别用醋酸乙酯振摇提取2，3，4，5次，10 ml/次，合并醋酸乙酯液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇转移至10ml量瓶中，并加无水乙醇稀释至刻度，即得。精密吸取上述供试品溶液各适量于具塞试管中，按“2.3”项下依法显色测定吸光度，计算含量分别为5.85% ，6.26% ，6.60% ，6.63% 。结果表明，振摇提取4次和5次所得总皂苷含量相差不大，因此选择振摇提取4次。

　　2.2.6 药材粉碎度的考察取翼首草粉末(分别过2，3，4，5号筛)约0.1 g，精密称定，加无水乙醇30 ml，浓盐酸3 ml，于90℃水浴回流3h，按“2.2.1”项下供试品溶液A制备，从“滤过”起依法操作，即得。精密吸取上述供试品溶液各适量于具塞试管中，按“2.3”项下依法显色测定吸光度，计算含量为6.59% ，6.37% ，6.31% ，6.30%。结果表明，药材粉碎过2号筛所得总皂苷含量最高。

　　总结供试品溶液制备方法：取翼首草粉末(过2号筛)约0.1g，精密称定，加无水乙醇30 ml，浓盐酸3 ml，于90℃水浴回流3h，滤过，滤液蒸干，残渣加蒸馏水10 ml超声溶解，用醋酸乙酯振摇提取4次，每次10 ml，合并醋酸乙酯液，回收溶剂至干，残渣加无水乙醇转移至10 ml量瓶中，并加无水乙醇稀释至刻度，即得。

　　2.3 标准曲线的制备精密吸取“2.1”项下齐墩果酸对照品溶液30，36，42，48，54 l于具塞试管中，水浴蒸干，分别精密加入5%香草醛冰醋酸溶液0.6 ml，70%硫酸溶液5 m1，摇匀，于70cc水浴加热40 min，取出，冰水浴冷却1 h，室温放置1 h，以相应试剂为空白，于535nm处测定吸光度。以齐墩果酸的含量( g)为横坐标(X)、齐墩果酸吸光度(A)为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算得直线回归方程为：Y=0.014 1X+0.042 0(r=0.999 9)。结果表明，齐墩果酸在25.35～45.63 g范围内，线性关系良好。

　　2.4 精密度考察取同一对照品溶液，按“2.3”项下方法重复测定吸光度6次，计算得RSD为0.097% 。结果表明，仪器精密度良好。

　　2.5 稳定性考察精密吸取“2.1”项下齐墩果酸对照品溶液30ml，“2.2.6”项下过2号筛供试品溶液60 l于具塞试管中，按“2.3”项下方法显色。计时测定，隔30 min测定一次吸光度值，共测定3 h，计算得RSD分别为0.92%和0.75% 。结果表明，对照品溶液及供试品溶液在显色操作完成后3 h内稳定。

　　2.6 重复性实验取翼首草粉末(过2号筛)约0.1 g(6份)，精密称定，按拟定的供试品溶液制备方法操作，精密吸取所得供试品溶液各60 nl，再按“2.3”项下方法测定吸光度，计算得平均含量为6.58% ，RSD为1.21% 。结果表明，此方法重复性良好。

　　2.7 加样回收实验精密称取已知总皂苷含量(6.58%)的样品9份，分别按样品中总皂苷含量的80% ，100%和120%精密加入对照品，每个梯度3份。按拟定的供试品溶液制备方法和“2.3”项下测定方法操作，计算回收率。于样品前处理较复杂，回收率在90% ～94%之间，符合药典规定。

　　2.8 样品含量测定取不同产地及不同药用部位的翼首草13批药材粉末(过2号筛)各0.1 g，精密称定，按拟定的供试品溶液制备方法操作，精密吸取各批供试品溶液50～60ml，再按“2.3”项下方法测定各批次总皂苷含量。

　　不同产地的带根全草翼首草总皂苷的含量差异不大，但四川产的翼首草总皂苷的含量略高。而西藏所采的3批翼首草根总皂苷的含量却又明显高于其他产地的带根全草。

　　3 讨论

　　从线性、精密度、稳定性、重复性及加样回收率等实验结果可以看出，用紫外分光光度法测定翼首草中总皂苷的含量准确、稳定、灵敏。本法可作为药材含量测定标准之一。

　　显色时，所用显色试剂均须临用新配，否则反应不完全，测得的含量降低;测定前应避免暴露于强光之下和剧烈晃动，因为不利于硫酸稳定，影响吸光值的准确性。

　　本实验首次详细考察了影响翼首草总皂苷提取的6个主要因素，分别是提取溶媒和水解方式、溶媒用量、提取温度、水解时间、萃取次数、药材粉碎度。确定了最佳制备方法，其中提取溶媒和水解方式对总皂苷提取的影响最大。

　　从13批不同产地和不同部位总皂苷的含量分析，以西藏所采的3批翼首草根的总皂苷含量明显高于其他产地翼首草带根全草的含量，提示根中总皂苷的含量有可能高于全草，还需要对同一产地，同一批次不同部位总皂苷的含量进行比较来进一步的证实。

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