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来源：职称驿站所属分类：临床医学论文 发布时间：2015-06-08浏览：14次
摘要：建立覆盆子中金丝桃苷的含量测定方法。方法 采用HPLC法。SinoChrom ODS BP色谱柱(5µm，4.6×250mm)，流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(15:85)，检测波长：360nm。结果 金丝桃苷浓度线性范围0.00506~0.1012mg/ mL，r =0.99994;样品平均回收率为98.77%，RSD=1.57%(n=6)。结论 该方法简便、准确、重现性好，可用于该中药的含量测定。
关键词：覆盆子,金丝桃苷,HPLC ,药学,快速发表论文
覆盆子为蔷薇科植物华东覆盆子Rubus chingii Hu的干燥果实，有益肾固精缩尿、养肝明目的功效，用于治疗遗精滑精，遗尿尿频，阳痿早泄，目暗昏花。覆盆子果实中含有三萜类成分，覆盆子酸，鞣花酸，椴树苷，胡萝卜苷[1]，另有文献报道，尚含黄酮化合物[2,3]。由于覆盆子基础研究薄弱，2010年版《中国药典(一部)》中仅有性状鉴别和显微鉴别。目前已有椴树苷的HPLC含测方法报道，但尚无覆盆子中的金丝桃苷定量测定的文献。本实验采用HPLC法对其进行了含量测定，结果表明，该方法快速简捷、重现性好，取得了满意的结果。
1 实验部分
1.1 仪器与试药
HP-Agilent1100型高效液相色谱仪，包括G1322A真空脱气机，G1311A四元泵，G1313A自动进样器，G1365A多波长检测器，LGC-1025M柱温箱，HP Rev.A.07.01色谱工作站;BP211D型1/10万电子分析天平(德国Sartorius公司);250超声波清洗器(上海)。
金丝桃苷对照品(供含测用，中国药品生物制品检定所提供，批号：111521-200303)。乙腈(色谱纯，美国Tedia公司)，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。
覆盆子Rubi Fructus，经鉴定为蔷薇科植物华东覆盆子Rubus chingii Hu的干燥果实。
1.2 方法与结果
1.2.1 色谱条件与系统适用性考察
色谱柱：SinoChrom ODS BP(5µm，4.6×250mm);流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(15:85);流速：1mL/min;检测波长：360nm;柱温：30℃;进样量：10µL;理论板数按金丝桃苷峰计算应不低于5000。
1-金丝桃苷 1-Hyperin
图1 对照品(A)和样品(B)的色谱图
Fig.1 Chromatograms of reference substance(A)and sample(B)
1.2.2 对照品溶液的制备
精密称取金丝桃苷对照品10.12mg，置100mL量瓶中，加80%甲醇使溶解并定容至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密吸取2mL，置10mL量瓶中，加80%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
1.2.3 供试品溶液的制备
取本品粉末(过四号筛)1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250w，频率40kHz)1小时，放冷，再称定重量，加80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
1.2.4 线性关系考察
精密吸取“1.2.2” 项制备的对照品贮备液0.5，1，2，3，5，10mL，置10mL量瓶中，加80%甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取上述溶液10µL，按“1.2.1”项色谱条件测定，以进样浓度为横坐标(X：mg/mL)，峰面积积分值为纵坐标(Y ：mAU*s)，进行线性回归，得回归方程：Y = 208.3 1X - 0.0134，r = 0.999 94。结果表明，金丝桃苷在0.00506~0.1012mg/mL的范围内呈良好线性关系。
1.2.5 精密度试验
精密吸取“1.2.2”项下制备的对照品溶液10µL，重复进样6次，测定峰面积，结果RSD=0.22%，表明本法精密度良好。
1.2.6 稳定性试验
取供试品溶液于制备后0、2、4、6、8、10h进样，金丝桃苷峰面积的RSD=0.59%，表明供试品溶液在10h内稳定。
1.2.7 重复性试验
称取同一批样品6份，按“1.2.3”项下方法处理并测定含量，结果金丝桃苷RSD=1.17%，表明此方法重复性较好。
1.2.8 回收率试验
称取已知含量的样品6份，分别精密加入一定量的对照品，按“1.2.3”项下方法处理并测定含量，分别计算样品加样回收率(结果见表1)，平均回收率为98.77%，RSD=1.57%。
表1 金丝桃苷回收率试验结果
2 讨论与总结
2.1 流动相的选择
本实验通过对乙腈-水、乙腈-0.1%磷酸溶液等多种不同比例的流动相进行比较试验，结果乙腈-0.1%磷酸溶液比例为15:85的系统分离效果较好，且峰形较好，故选择本系统为流动相。
2.2 含量测定的讨论
本实验中1.2.9样品的含量测定中第二批的含量和其它两批含量差异较显着，分析原因可能与覆盆子来源不同有关系，因此，仍需做大量实验来验证。
2.3 含量与功效的关系
本实验确定了覆盆子中的黄酮类化合物为金丝桃苷，但是金丝桃苷含量的高低与覆盆子的功效之间的联系仍不明确，还有待进一步研究。
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